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腫瘤臨床科研服務
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數字PCR技術

 原理:將一個標准PCR反應分派到大量微小的反應器中,在每個反應器中包罗或不包罗一個拷貝的目標分子(DNA模板) ,實現“單分子模板PCR擴增”,擴增結束後,通過陽性反應器的數目“數出”目標序列的拷貝數。

儀器:QuantStudio 3D數字PCR儀系統

流程:首先,將混有樣品和檢測探針PCR反應體系均勻疏散至一張帶有2萬個微孔的芯片上,形成近2萬個微反應體系;經PCR擴增後,檢測每個微孔的熒光信號;最後統計計算目標片段拷貝數。
優點:可絕對定量,靈敏度可達單個核酸分子,檢測限低至0.01%

缺點:
只能檢測已知的突變位點,通量低。


應用:
 

産品名稱

適合腫瘤

適用樣本

應用

數字PCR技術

所有腫瘤

血漿ctDNA

FFPE

1) ctDNA直接檢出已知的腫瘤特征的低頻體細胞突變,用于早期診斷、病程監控、療效評估等,可以做到絕對定量。

2) 针对利用扩增子测序技術從ctDNA中檢出的低頻體細胞突變進行序列驗證。


代表案例:
利用數字PCR技術從ctDNA中直接檢出已知的肿瘤特征體細胞突变。


目的:采取
dPCR技術灵敏而准确的动态监测治疗阶段病人血漿中癌症相关低品貌EGFRBRAFKRAS基因突變(包罗耐藥突變)突變頻率的變化,以便調整治療方案。 結果:9個經erlotinib一線治療之後的NSCLC病人血漿中EGFR基因突變L858RT790M的突變頻率隨時間變化而變化。

文獻出處:Oxnard G Ret al.Clinical Cancer Research 2014(20):1698-1705.

 


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