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NGS科研用建庫試劑盒
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K02420-S/L   Balancer NGS Library Preparation Kit for small/microRNA – Illumina Compatible

流程介紹
      small/microRNA文库制备试剂盒能有效去除引物二聚体,并在同样数据量中得到更多种类的小RNA。具有单一试管反响、一天事情流程的特点。整个流程从总RNA开始,经过讨论连接、反转录、PCR和切胶采取的历程,可构建适合Illumina测序仪的small/microRNA文库。通过优化实验流程,有效淘汰了讨论的二聚体,可以从最少10ng 总RNA中乐成完成文库构建,同时有效低落了连接反响的偏好性(bias),使得客户能够在同样的测序深度来发明更多的小RNA和microRNA,产生更好的科研发明。该产物可被遍及应用于阐发种种临床样品(如FFPE样品和血清/血浆样本)的总RNA。
 
流程圖
 
 
流程優勢
• 更多地發現——有效去除連接偏好性(bias);
• 更優的數據質量——顯著去除接頭二聚體;
• 優化的實驗流程——單管一天實驗流程。
• 以總RNA作爲起始反應物——無須進一步的純化;
• 10ng總RNA便可進行;
• 可應用于血清和FFPE樣品;
• 適合自動化操纵。
 
産品信息

貨號

産品名

規格

K02420-S

Balancer NGS Library Preparation Kit for small/microRNA – Illumina Compatible

12 rxn

K02420-L

Balancer NGS Library Preparation Kit for small/microRNA – Illumina Compatible

48 rxn

 
常見問題解答
1. 你们是否处理惩罚过血清样本,对付血清样本你们是否有什么发起?需要多少血清能够提取出足够建库的total RNA?
      我们处理惩罚过大量血清样本,有优化过的total RNA纯化的流程。通常0.5-1ml血清就可以得到建库足够的total RNA。虽然,这也和血清样本的生存状况有关。
 
2. 你们的barcode序列在哪个位置?barcode有多少种?
      我们的barcode序列存在于PCR 引物上,有48种。
 
3. 在实验历程中比力重要的步调是哪几个步调?
      只要样本中存在小RNA,凭据我们的protocol操纵一般是不会出现问题的。需要注意的只有一点:我们发起大家在建库时做一个不加样本的负比较,这样可以清晰的视察到小RNA的条带电泳的位置,并和可能产生的引物二聚体区分,这样不会错误采取引物二聚体片段。胶尽量跑远,割胶前后都要照相。不但一条条带时分别切胶采取等也都是淘汰无用数据的要领。
 
4. 你们两端的讨论加起来长度是多少?所切的片段巨细是多少?
      micro RNA试剂盒5’和3’讨论加起来长度是118bp。在切胶采取的时候,会切取140bp-160bp之间的片段。发起做阴性比较,这样可以清楚的识别出所需要的小RNA。
 
5. 在高通量测序中,小RNA 建库历程中是通过什么方法来淘汰引物二聚体的形成的?
      这是我们小RNA文库制备的试剂盒的另一个主要优势:在小RNA与3’讨论连接后,参加RT-primer。RT- primer可以与3’讨论互补联合,形成RNA:DNA双链杂合体。这些双链杂合体不能作为RNA连接酶的底物,和后期参加的5’讨论连接,从而淘汰了引物二聚体的形成。
 
6. 在高通量测序中,小RNA 建库历程中怎么去除mRNA及rRNA的?在哪步去除?
      小RNA 建库历程中mRNA和rRNA不需要去除,因为它们不滋扰整个反响。在小RNA 讨论连接的时候,所用的RNA连接酶对付长的片段的连接效率低,两端同时连上讨论的品种大多数是小RNA。少数掺入的mRNA或rRNA会因分子量的差别,在凭据片段长度切胶纯化的历程中,自然而然地去除了。如果mRNA存在降解,并且降解的mRNA条带在小RNA条带四周,在测序效果中会看到这些降解mRNA的存在。
 
7. 在高通量测序中,small RNA文库构建是怎么办理序列偏好性(bias)的?
      这是我们小RNA文库制备的试剂盒的主要优势之一:在5’讨论的连接序列处序列进行了调解,有效去除了序列偏好性。在相同的数据量下,可以找到更多种类的小RNA,去发明别的技能可能丢失的信息。
 
8. 在高通量测序中,small RNA 文库构建是从total RNA起始的吗?一般 total RNA 需要的量是多少?最低起始量是多少?
      small RNA 文库构建是从total RNA起始的。在建库中,一般total RNA的用量是1ug,最低起始量是10ng。small RNA 建库的要害之处是提取的RNA中是否有small RNA,及含有的small RNA 的多少。差别物种差别样品提取的small RNA的含量都差别,一般情况下,样品起始量为1ug total RNA,PCR进行12个循环。
 

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