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NGS科研用建庫試劑盒
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K02421T-S/L RNA Seq Library Preparation Kit for Transcriptome Discovery–Illumina Compatible

流程介紹
       科維思RNA轉錄組測序文庫構建試劑盒主要特點有:單管反應,較少的實驗操纵,一天即可完成整個流程。測序接頭直接連接在mRNA或合成的第一條cDNA上,這使得我們能對轉錄組進行偏向性測序。這種要领所提供的偏向性信息對RNA從頭測序(de novo)來說有極大的幫助,同時還有助于識別各種調控事件中相互關聯的轉錄RNA信息。通過省略一些步驟,低落了樣品起始量,該試劑盒可實現低至1ng mRNA樣品的文庫構建,還可以應用于FFPE樣品的建庫。
流程圖


産品優勢
• 更好的偏向性信息——五种偏向性RNA建库产物比力,本产物的偏向性更好
• 更好的科学发明——对全转录组进行偏向性测序
• 更简单的流程——省略了第二条cDNA链合成和讨论连接步调
• 更小的样本初始量——低至1ng mRNA
• 单管反响,整个实验流程只需一天
  

品信息

貨號

産品名

規格

K02421T-S

RNA Seq Library Preparation Kit for Transcriptome Discovery–Illumina Compatible

12 rxn

K02421T-L

RNA Seq Library Preparation Kit for Transcriptome Discovery–Illumina Compatible

48 rxn

 
常見問題解答
1. 在RNA转录组建库流程中用到Gnome Size Selector的原理及用途?
      在RNA转录组建库流程中3次用到Gnome Size Selector。第一次是在RNA5’讨论连接之后,是RNA水平的size selection。目的是去除未连接的5’讨论,并进行缓冲液的置换。第二次是在第一链cDNA合成之后,是单链cDNA的size selection。目的是去除多余的RT primer,并进行缓冲液的置换。第三次是对PCR产物进行分子量区间的筛选,是更通例意义上的size selection。
 
2. RNA断裂的大抵片段区间是多少?
      在我们提供的断裂体系中,95度5min断裂的片段巨细大概在100-700nt。其中主要片段漫衍在300-500nt。对分子量区间有其它要求的用户请联系技能支持。
 
3. RNA Seq 构建的文库讨论和Illumina的讨论是否有区别?
      用我们的要领构建的RNA Seq的文库和IlluminaTruSeq 完全兼容。虽然由于流程的区别,选用的种种adaptor和逆转录引物是差别的,所以不可以用Illumina的RT或PCR引物替换我们提供的引物。
 
4. RNA转录组样品制备试剂盒可以用来做降解组实验吗?在操纵流程上的差别在哪?
      可以。我们已经将流程进行了调解,正在积聚数据的阶段。在时机成熟的时候会有新产物上市。有兴趣的客户可以联系技能支持得到更多信息。
 
5. RNA转录组样品制备,PCR需要多少个循环?
      PCR循环数与样品起始量,及整个流程操纵下来RNA的收率有关,差别的人效果差别,所以在做PCR时需要进行一个条件摸索。一般条件下如果是100ng左右的起始mRNA发起做10-13个循环。
 
6. RNA转录组样品制备流程中关于温度的控制一般在什么仪器上进行?
      发起在PCR仪上进行,这样有利于温度的控制。
 
7. RNA转录组样品制备是否有偏向性?讨论是怎么加的?
      RNA转录组文库构建是有偏向性的。在被断裂的RNA5’端加上讨论,在合成第一链cDNA的时候通过逆转录引物引入另一个讨论。这样生成的第一链cDNA的两端各有一个讨论,mRNA序列对应的5’和3’讨论序列是不一样的。所以测序得到的效果可以知道序列的走向。
 
8. RNA转录组样品制备,整个流程需要多长时间?原因是为什么?
      RNA转录组样品制备步调简单,耗时少,只需要6个小时即可完成。主要步调为RNA断裂,5’讨论的连接,第一条cDNA的逆转录和PCR扩增及纯化。因为淘汰了第二条cDNA链的生成和下游DNA文库的构建,所以流程大大缩短。
 
9. 高通量测序RNA 转录组样品制备,mRNA一般的用量是多少?最低起始量是多少?
      mRNA一般的用量是100ng,PCR进行10-13个循环。mRNA起始量可以降到10ng,PCR进行15个循环左右,得到的数据信息笼罩率和100ng差别不大。如图1所示,10ng与100ng的样品起始量建库所得数据,经数据阐发,两者的基因组匹配率与外显子匹配率差别不大。
 
 
10. 高通量测序RNA 转录组样品制备是从Total RNA 起始照旧从mRNA起始?如果从mRNA起始,试剂盒中包罗提取mRNA的试剂吗?
      RNA 转录组样品制备是从mRNA起始的,本公司试剂盒中不包罗提取mRNA的试剂。发起大家使用SeradynOligo d(T)(貨號:2815-2103-011150)的磁珠,进行两次纯化。
 

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